Tinción de endosporas y tinción de flagelos

Tinción de endosporas

Se usa para detectar la presencia de endosporas en seis géneros bacterianos. Cuando se aplica verde de malaquita a una extensión fijada por calor de  células bacterianas este colorante penetra en las endosporas y las tiñe de verde. Se aplica después safranina, que tiñe el resto de la célula rosa.

Tinción de flagelos

Sirve para demostrar la presencia de flagelos. Se usa un mordiente para engrosar el diámetro de los flagelos hasta ser visibles al microscopio luego de ser  teñidos con carbolfuchsina.

Tinciones especiales y tinción negativa

Tinciones especiales

Utilizadas para teñir y destacar diversas estructuras como cápsulas, endosporas y flagelos; a veces sirven de ayuda al diagnostico.

Tinción negativa

Utilizada para demostrar la presencia de cápsulas. Como las cápsulas no toman la mayoría de los colorantes, aparecen como un halo alrededor de las células bacterianas destacando sobre fondo oscuro.

Tinción ácido – alcohol resistencia

Esta tinción se utiliza para diferenciar Mycobacterium y Nocardia.

Las bacterias ácido - alcohol resistentes teñidas con carbolfuchsina y tratadas con ácido y alcohol permanecen rojas porque retienen el colorante. 

Las no acido – alcohol resistentes pierden el colorante en el mismo tratamiento y quedan azules  al ser teñidas con azul de metileno.

Tinción de Gram

La tinción de gram divide las bacterias en dos grandes grupos, gram positivas y gram negativas. 

Las gram positivas retienen el cristal violeta y aparecen moradas. Las bacterias gram negativas no lo retienen y permanecen incoloras hasta ser teñidas por el colorante de contraste, apareciendo en rosa.

En esta técnica se cubre la extensión fijada por calor con un colorante básico morado, generalmente cristal violeta, se lava el colorante y se cubre con yodo. Se lava. En este momento tanto las bacterias gram positivas como las gram negtivas aparecen de color morado oscuro. A continuación se lava la muestra con una solución de etanol y acetona, luego se lava con alcohol y se tiñe con safranina.

Las bacterias que se observan de color morado son las gram positivas y las que se visualicen de rosa son las gram negativas.

Tinciones diferenciales

En contraste con las tinciones simples, las tinciones diferenciales dan reacciones distintas con diferentes tipos de bacterias y por lo tanto permiten distinguirlas.

Las tinciones diferenciales utilizadas mas frecuentemente para las bacterias son la tinción de gram y la tinción de ácido – alcohol resistencia.

Tinciones simples

Un colorante simple es una solución acuosa o alcoholica de un solo colorante básico. 

El objetivo primario de una coloración simple es destacar al microorganismo entero, de forma que la morfología y las agrupaciones celulares resulten visibles. El colorante se aplica a la extensión fijada durante un tiempo determinado, después se lava y la preparación seca se examina.

Algunos de los colorantes simples utilizados con frecuencia en los laboratorios son el azul de metileno, la carbolfuchsina, el violeta de genciana y la safranina.